Применение нитроцефина:

Нитроцефин - хромогенный субстрат β-лактамаз, который изменяет цвет с желтого на красный по мере того, как амидная связь в β-лактамном кольце гидролизуется β-лактамазой. Нитроцефин изменяет цвет под действием лактамаз, вырабатываемых грамположительными и грамотрицательными бактериями. В ряде исследований свойства нитроцефина изменять цвет использовались для выявления активности β-лактамаз в экстрактах бактериальных клеток с помощью изоэлектрической фокусировки и спектроскопии. Нитроцефин также использовался в исследованиях, связанных с устойчивыми к β-лактамазе антибиотиками.

Химические свойства

Метод использования нитроцефина

1.Приготовление раствора для хранения цефнитротиофена (10 мг/мл) a) Перед использованием извлеките продукт из холодильника и поместите его при комнатной температуре минимум на 20 минут перед центрифугированием на низкой скорости; b) Отсос 100 мк Добавьте 1 мг цефнитротиофена в высококачественный ДМСО, полностью растворите и хорошо перемешайте. Можно расфасовать на одну дозу и хранить в темноте при -20 °С.

2. Типичная рабочая концентрация для приготовления цефалоспорина с рабочим раствором 1мг/мл составляет 0,5-1,0мг/мл, и этот препарат обычно имеет желтый цвет. Отберите 20 μ Добавьте 180 к раствору для хранения цефнитротиофена (10мг/мл) μ После смешивания с буферным раствором PBS (0,1М, нейтральный рН), получается рабочий раствор цефалоспорина тиофена (1мг/мл). Избыток рабочего раствора может храниться в темном месте при температуре -20 °С и должен быть израсходован в течение 2 недель.

3. Быстрое обнаружение и анализ После контакта с бактериями, продуцирующими β-лактамы, тестируемые образцы, как правило, быстро дают положительную реакцию. Обычно рекомендуется время реакции 20-30 минут и отрицательный контроль.

-3.1 Метод анализа поверхности предметного стекла

a) Нанесите каплю рабочего раствора цефнитротиофена (1 мг/мл) на чистую поверхность предметного стекла;

b) С помощью стерильного инокуляционного кольца отберите клон твердой культуры и равномерно смешайте его с жидкими каплями Chemicalbook;

в) Если в течение 20-30 минут наблюдается красный цвет, это свидетельствует об активности фермента β-лактама. При необходимости добавьте еще несколько капель рабочего раствора цефнитротиофена, чтобы предотвратить высыхание

-3.2 Метод прямого контактного анализа

a) Нанесите каплю рабочего раствора цефнитротиофена (1 мг/мл) непосредственно на поверхность выделенной колонии;

б) Если в течение 20-30 минут наблюдается красный цвет, это указывает на активность фермента β-лактама.

-3.3 Метод анализа бульонной среды

a) Возьмите 1 мл бульонной среды и добавьте 3-5 капель рабочего раствора цефнитротиофена (1 мг/мл);

б) Если в течение 20-30 минут наблюдается красный цвет, это указывает на активность фермента β-лактама.

-3.4 Метод анализа клеточного лизата

a) Ультразвуковой лизис 1 мл клеточной суспензии;

b) Добавьте 3-5 капель рабочего раствора цефнитротиофена (1 мг/мл) к суспензии для лизиса; c) Если в течение 20-30 минут наблюдается красный цвет, это свидетельствует об активности фермента β-лактама.

-3.5 Метод анализа на фильтровальной бумаге

a) Пропитайте небольшой кусок фильтровальной бумаги (~3x3 см) рабочим раствором цефнитротиофена (1 мг/мл), а затем поместите его в чистую культуральную посуду;

b) Отпрыгните отделенный клон и нанесите его на пропитанную фильтровальную бумагу;

в) Если в течение 20-30 минут наблюдается красный цвет, это указывает на активность фермента β-лактама.