니트로세핀 애플리케이션:

니트로세핀은 발색성 β-락타마제 기질로 β-락탐 고리의 아미드 결합이 β-락타마제에 의해 가수분해되면서 노란색에서 빨간색으로 색이 변합니다. 니트로세핀은 그람 양성 및 그람 음성 박테리아에 의해 생성되는 락타마제에 의해 색이 변합니다. 여러 연구에서 등전 초점 및 분광법을 통해 박테리아 세포 추출물에서 β-락타마제 활성을 검출하기 위해 니트로세핀의 색상 변화 특성을 활용했습니다. 니트로세핀은 β-락타마제 내성 항생제 관련 연구에도 사용되었습니다.

화학적 특성

니트로세핀 사용 방법

1. 세프니트로티오펜 보관 용액 (10mg/ml)의 준비 a) 사용하기 전에 제품을 냉장고에서 꺼내 실온에서 최소 20 분 동안 둔 후 저속으로 원심분리하고, b) 고품질 DMSO에 세프니트로티오펜 1mg을 100μ 첨가하고 완전히 녹이고 잘 섞습니다. 1회 복용량에 따라 포장하여 -20°C에서 어두운 곳에 보관할 수 있습니다.

2. 1mg/ml의 작업 용액으로 세 팔로 스포린을 준비하기위한 일반적인 작업 농도는 0.5-1.0mg/ml이며이 준비는 일반적으로 노란색입니다. 세프니트로티오펜(10mg/ml)의 보관 용액에 180 μ를 추가합니다. μ PBS 완충액(0.1M, 중성 pH)과 혼합한 후 세팔로스포린 티오펜(1mg/ml) 작업 용액을 얻습니다. 여분의 작동액은 -20°C의 어두운 곳에 보관할 수 있으며 2주 이내에 모두 사용해야 합니다.

3. 빠른 검출 및 분석 β- 락탐 생성 박테리아와 접촉하면 테스트할 샘플은 일반적으로 빠르게 양성 반응을 일으킬 수 있습니다. 일반적으로 20~30분 정도의 반응 시간을 갖고 음성 대조군을 설정하는 것이 좋습니다.

-3.1 유리 슬라이드 표면 분석 방법

a) 깨끗한 유리 슬라이드 표면에 세프니트로티오펜 작업 용액(1mg/ml) 한 방울을 떨어뜨립니다;

b) 멸균 접종 링을 사용하여 고체 배양 클론을 선택하고 액체 케미컬북 방울과 골고루 섞습니다;

c) 20-30 분 이내에 붉은 색이 관찰되면 β- 락탐 효소 활성이 있음을 나타냅니다. 필요한 경우 건조를 방지하기 위해 세프니트로티오펜 작업 용액을 더 추가합니다.

-3.2 직접 접촉 분석 방법

a) 분리된 콜로니의 표면에 세프니트로티오펜 작업 용액(1mg/ml) 한 방울을 직접 빨아들입니다;

b) 20-30분 이내에 붉은 색이 관찰되면 β- 락탐 효소 활성이 있음을 나타냅니다.

-3.3 배양액 분석 방법

a) 국물 배양 배지 1ml를 취하고 세프니트로티오펜 작업 용액(1mg/ml) 3~5방울을 추가합니다;

b) 20-30분 이내에 붉은 색이 관찰되면 β- 락탐 효소 활성이 있음을 나타냅니다.

-3.4 세포 용해물 분석 방법

a) 1ml 세포 현탁액의 초음파 용해;

b) 용해 현탁액에 세프니트로티오펜 작업 용액(1mg/ml) 3~5방울을 추가합니다. c) 20~30분 이내에 붉은 색이 관찰되면 β- 락탐 효소 활성이 있음을 나타냅니다.

-3.5 여과지 분석 방법

a) 작은 여과지(~3x3cm)에 세프니트로티오펜 작업 용액(1mg/ml)을 적신 다음 깨끗한 배양 접시에 넣습니다;

b) 분리된 클론을 점프하여 함침된 필터 용지에 적용합니다;

c) 20-30분 이내에 붉은 색이 관찰되면 β- 락탐 효소 활성이 있음을 나타냅니다.