ニトロセフィンの用途

ニトロセフィンは発色性のβ-ラクタマーゼ基質であり、β-ラクタマーゼによってβ-ラクタム環のアミド結合が加水分解されると黄色から赤色に変色する。ニトロセフィンは、グラム陽性菌やグラム陰性菌が産生するラクタマーゼによって色変化を起こす。いくつかの研究では、ニトロセフィンの変色特性を利用して、等電点集光法や分光法を用いて細菌細胞抽出液からβ-ラクタマーゼ活性を検出している。ニトロセフィンは、β-ラクタマーゼ耐性抗生物質に関する研究にも使用されている。

化学的性質

ニトロセフィン使用法

1.Preparation of Cefnitrothiophene の貯蔵の解決（10mg/ml） a) 使用の前に、プロダクトを冷却装置から取除き、低速で遠心分離機の前に少なくとも 20 分の室温に置いて下さい; b) 吸引 100 μ 良質の DMSO に Cefnitrothiophene の 1mg を加え、十分に分解し、そしてよく混合して下さい。これは、1回の投与量に応じて包装し、-20℃で暗所に保存することができる。

2.セファロスポリンを1mg/mlの作業溶液で調製する場合の典型的な作業濃度は0.5～1.0mg/mlであり、この調製液は一般に黄色である。セフニトロチオフェン（10mg/ml）の保存液に20μを取る μ PBS緩衝液（0.1M、中性pH）と混合後、セファロスポリンチオフェン（1mg/ml）の作業液が得られる。余剰の作業液は-20℃の暗所に保存でき、2週間以内に使い切ること。

3.迅速な検出と分析 β-ラクタム産生菌と接触すれば、一般的に検査対象検体は迅速に陽性反応を示す。通常、反応時間は20～30分とし、陰性対照を設定することを推奨する。

-3.1 スライドグラス表面分析法

a) Cefnitrothiophene作業溶液（1mg/ml）を清潔なスライドグラス表面に滴下する；

b) 滅菌接種リングを用いて固体培養クローンを選択し、液体ケミカルブック滴下と均一に混合する；

c) 20-30分以内に赤色が観察されれば、β-ラクタム酵素活性があることを示す。必要ならば、乾燥を防ぐために Cefnitrothiophene の働く解決のより多くの低下を加えて下さい

-3.2 直接接触分析法

a) 分離したコロニーの表面にCefnitrothiophene working solution（1mg/ml）を直接滴下する；

b) 20-30分以内に赤色が観察されれば、β-ラクタム酵素活性があることを示す。

-3.3 ブロス培地分析法

a) ブロス培地1mlをとり、Cefnitrothiophene working solution（1mg/ml）を3～5滴加える；

b) 20-30分以内に赤色が観察されれば、β-ラクタム酵素活性があることを示す。

-3.4 細胞溶解液分析法

a) 1mlの細胞懸濁液の超音波溶解；

b) 溶解懸濁液にCefnitrothiophene working solution (1mg/ml)を3-5滴加える。c) 20-30分以内に赤色が観察されれば、β-ラクタム酵素活性を示す。

-3.5 ろ紙分析法

a) 小片のろ紙（～3x3cm）にCefnitrothiophene作業溶液（1mg/ml）を染み込ませ、清潔な培養皿に入れる；

b) 分離したクローンをジャンプさせ、含浸させたろ紙に貼り付ける；

c) 20-30分以内に赤色が観察されれば、β-ラクタム酵素活性があることを示す。