Applications de la nitrocéfine :

La nitrocéfine est un substrat chromogène de la β-lactamase qui passe du jaune au rouge lorsque la liaison amide de l'anneau β-lactame est hydrolysée par la β-lactamase. La nitrocéfine subit des changements de couleur induits par les lactamases produites par les bactéries Gram-positives et Gram-négatives. Plusieurs études ont utilisé les propriétés de changement de couleur de la nitrocéfine pour détecter l'activité de la β-lactamase à partir d'extraits de cellules bactériennes par focalisation isoélectrique et spectroscopie. La nitrocéfine a également été utilisée dans des études portant sur des antibiotiques résistants à la β-lactamase.

Propriétés chimiques

Méthode d'utilisation de la nitrocéfine

1.Préparation de la solution de stockage de Cefnitrothiophène (10mg/ml) a) Avant utilisation, sortir le produit du réfrigérateur et le placer à température ambiante pendant au moins 20 minutes avant de le centrifuger à faible vitesse ; b) Aspirer 100 μ Ajouter 1mg de Cefnitrothiophène à du DMSO de haute qualité, dissoudre complètement et bien mélanger. Il peut être emballé selon un dosage unique et stocké dans l'obscurité à -20 ° C.

2. La concentration de travail typique pour la préparation de céphalosporine avec une solution de travail de 1mg/ml est de 0,5-1,0mg/ml, et cette préparation est généralement de couleur jaune. Prélever 20 μ Ajouter 180 à la solution de stockage de Cefnitrothiophène (10mg/ml) μ Après mélange avec la solution tampon PBS (0,1M, pH neutre), on obtient la solution de travail de céphalosporine thiophène (1mg/ml). L'excès de solution de travail peut être conservé à l'abri de la lumière à -20°C et doit être utilisé dans les 2 semaines.

3. Détection et analyse rapides Une fois en contact avec des bactéries productrices de β- lactamines, les échantillons à tester peuvent généralement produire rapidement une réaction positive. Il est généralement recommandé d'avoir un temps de réaction de 20 à 30 minutes et de mettre en place un contrôle négatif.

-3.1 Méthode d'analyse de la surface de la lame de verre

a) Prélever une goutte de solution de travail de Cefnitrothiophène (1mg/ml) sur une lame de verre propre ;

b) Utiliser un anneau d'inoculum stérile pour sélectionner un clone de culture solide et le mélanger uniformément avec les gouttes liquides de Chemicalbook ;

c) Si une couleur rouge peut être observée dans les 20-30 minutes, cela indique l'activité de l'enzyme β- Lactam. Si nécessaire, ajouter des gouttes supplémentaires de solution de travail de Cefnitrothiophène pour éviter le dessèchement.

-3.2 Méthode d'analyse par contact direct

a) Aspirer directement une goutte de solution de travail de Cefnitrothiophène (1mg/ml) sur la surface de la colonie isolée ;

b) Si une couleur rouge peut être observée dans les 20-30 minutes, cela indique une activité enzymatique β- Lactam.

-3.3 Méthode d'analyse du milieu de culture en bouillon

a) Prélever 1 ml de milieu de culture en bouillon et ajouter 3 à 5 gouttes de solution de travail de Cefnitrothiophène (1mg/ml) ;

b) Si une couleur rouge peut être observée dans les 20-30 minutes, cela indique une activité enzymatique β- Lactam.

-3.4 Méthode d'analyse du lysat cellulaire

a) Lyse par ultrasons d'une suspension cellulaire de 1 ml ;

b) Ajouter 3-5 gouttes de solution de travail de Cefnitrothiophène (1mg/ml) à la suspension de lyse ; c) Si une couleur rouge peut être observée dans les 20-30 minutes, cela indique l'activité de l'enzyme β- Lactam.

-3.5 Méthode d'analyse sur papier filtre

a) Saturer un petit morceau de papier filtre (~3x3cm) pour absorber la solution de travail de Cefnitrothiophene (1mg/ml), puis le placer dans une boîte de culture propre ;

b) Prélever un clone séparé et l'appliquer sur le papier filtre imprégné ;

c) Si une couleur rouge peut être observée dans les 20-30 minutes, cela indique une activité enzymatique β- Lactam.