Aplicaciones de la nitrocefina:

La nitrocefina es un sustrato cromogénico de β-lactamasa que experimenta un cambio de color de amarillo a rojo cuando la β-lactamasa hidroliza el enlace amida del anillo β-lactámico. La nitrocefina experimenta cambios de color inducidos por las lactamasas producidas por bacterias Gram-positivas y Gram-negativas. Varios estudios han utilizado las propiedades de cambio de color de la nitrocefina para la detección de la actividad de la β-lactamasa a partir de extractos de células bacterianas mediante enfoque isoeléctrico y espectroscopia. La nitrocefina también se ha utilizado en estudios sobre antibióticos resistentes a la β-lactamasa.

Propiedades químicas

Método de utilización de la nitrocefina

1.Preparación de la Solución de Almacenamiento de Cefnitrotiofeno (10mg/ml) a) Antes de su uso, retire el producto del refrigerador y colóquelo a temperatura ambiente durante al menos 20 minutos antes de centrifugar a baja velocidad; b) Aspirar 100 μ Añadir 1mg de Cefnitrotiofeno a DMSO de alta calidad, disolver completamente y mezclar bien. Puede ser envasado de acuerdo a una sola dosis y se almacena en la oscuridad a -20 ° C.

2. La concentración de trabajo típica para preparar cefalosporina con una solución de trabajo de 1mg/ml es de 0,5-1,0mg/ml, y esta preparación es generalmente de color amarillo. Tomar 20 μ Añadir 180 a la solución de almacenamiento de Cefnitrotiofeno (10mg/ml) μ Después de mezclar con solución tampón PBS (0,1M, pH neutro), se obtiene la solución de trabajo de cefalosporina tiofeno (1mg/ml). El exceso de líquido de trabajo se puede almacenar en un lugar oscuro a -20 ° C y debe ser utilizado dentro de 2 semanas.

3. Detección y análisis rápidos Una vez en contacto con las bacterias productoras de β-Lactámicos, las muestras a analizar pueden, por lo general, producir rápidamente una reacción positiva. Suele recomendarse un tiempo de reacción de 20-30 minutos y establecer un control negativo.

-3.1 Método de análisis de la superficie del portaobjetos

a) Tomar una gota de solución de trabajo de Cefnitrotiofeno (1mg/ml) sobre una superficie limpia de portaobjetos de vidrio;

b) Utilice un anillo de inóculo estéril para seleccionar un clon de cultivo sólido y mézclelo con gotas de Chemicalbook líquido de manera uniforme;

c) Si se observa color rojo en 20-30 minutos, indica que hay actividad enzimática β- Lactam. Si es necesario, añadir más gotas de solución de trabajo de Cefnitrotiofeno para evitar la sequedad.

-3.2 Método de análisis por contacto directo

a) Aspirar directamente una gota de solución de trabajo de Cefnitrotiofeno (1mg/ml) sobre la superficie de la colonia aislada;

b) Si se observa color rojo en 20-30 minutos, indica que hay actividad enzimática β- Lactam.

-3.3 Método de análisis del medio de cultivo en caldo

a) Tomar 1 ml de medio de cultivo de caldo y añadir 3-5 gotas de solución de trabajo de Cefnitrotiofeno (1mg/ml);

b) Si se observa color rojo en 20-30 minutos, indica que hay actividad enzimática β- Lactam.

-3.4 Método de análisis del lisado celular

a) Lisis por ultrasonidos de 1 ml de suspensión celular;

b) Añadir 3-5 gotas de solución de trabajo de Cefnitrotiofeno (1mg/ml) a la suspensión de lisis; c) Si se observa color rojo en 20-30 minutos, indica que hay actividad de la enzima β- Lactam.

-3.5 Método de análisis con papel de filtro

a) Saturar un pequeño trozo de papel de filtro (~3x3cm) para absorber la solución de trabajo de Cefnitrotiofeno (1mg/ml), y luego colocarlo en una placa de cultivo limpia;

b) Saltar un clon separado y aplicarlo al papel de filtro impregnado;

c) Si se observa color rojo en 20-30 minutos, indica que hay actividad de la enzima β- Lactam.