Nitrocefin Anwendungen:

Nitrocefin ist ein chromogenes β-Lactamase-Substrat, das bei der Hydrolyse der Amidbindung im β-Lactam-Ring durch β-Lactamase einen Farbwechsel von gelb nach rot erfährt. Nitrocefin unterliegt Farbveränderungen, die durch Lactamasen induziert werden, die von Gram-positiven und Gram-negativen Bakterien produziert werden. Mehrere Studien haben die farbverändernden Eigenschaften von Nitrocefin für den Nachweis von β-Lactamase-Aktivität aus bakteriellen Zellextrakten durch isoelektrische Fokussierung und Spektroskopie genutzt. Nitrocefin wurde auch in Studien mit β-Lactamase-resistenten Antibiotika verwendet.

Chemische Eigenschaften

Nitrocefin Verwendungsmethode

1.Vorbereitung von Cefnitrothiophen Aufbewahrungslösung (10mg/ml) a) Vor der Verwendung, entfernen Sie das Produkt aus dem Kühlschrank und legen Sie es bei Raumtemperatur für mindestens 20 Minuten vor der Zentrifugation bei niedriger Geschwindigkeit; b) Suck 100 μ hinzufügen 1mg Cefnitrothiophen zu hochwertigen DMSO, vollständig auflösen und gut mischen. Es kann entsprechend einer Einzeldosis verpackt und im Dunkeln bei -20 ° C gelagert werden.

2. Die typische Arbeitskonzentration für die Zubereitung von Cephalosporin mit einer Arbeitslösung von 1mg/ml beträgt 0,5-1,0mg/ml, und diese Zubereitung ist im Allgemeinen gelb gefärbt. Nehmen Sie 20 μ Zugabe von 180 zur Aufbewahrungslösung von Cefnitrothiophen (10mg/ml) μ Nach dem Mischen mit PBS-Pufferlösung (0,1M, neutraler pH-Wert) erhält man Cephalosporin Thiophen (1mg/ml) als Arbeitslösung. Überschüssige Arbeitsflüssigkeit kann an einem dunklen Ort bei -20 ° C gelagert werden und muss innerhalb von 2 Wochen verbraucht werden.

3. Schneller Nachweis und Analyse Einmal in Kontakt mit β-Lactam-produzierenden Bakterien, können die zu untersuchenden Proben im Allgemeinen schnell eine positive Reaktion hervorrufen. Es wird in der Regel empfohlen, eine Reaktionszeit von 20-30 Minuten einzuhalten und eine Negativkontrolle zu setzen.

-3.1 Methode zur Analyse der Glasobjektträgeroberfläche

a) Nehmen Sie einen Tropfen der Cefnitrothiophen-Arbeitslösung (1 mg/ml) auf einen sauberen Objektträger aus Glas;

b) Verwenden Sie einen sterilen Inokulum-Ring, um einen festen Kulturklon auszuwählen, und mischen Sie ihn gleichmäßig mit flüssigen Chemicalbook-Tropfen;

c) Wenn innerhalb von 20-30 Minuten eine rote Färbung zu beobachten ist, deutet dies auf eine Aktivität des β-Lactam-Enzyms hin. Falls erforderlich, weitere Tropfen Cefnitrothiophen-Arbeitslösung zugeben, um ein Austrocknen zu verhindern.

-3.2 Methode der direkten Kontaktanalyse

a) Einen Tropfen Cefnitrothiophen-Arbeitslösung (1mg/ml) direkt auf die Oberfläche der isolierten Kolonie saugen;

b) Wenn innerhalb von 20-30 Minuten eine rote Farbe beobachtet werden kann, deutet dies auf eine β-Lactam-Enzymaktivität hin.

-3.3 Methode zur Analyse des Nährbodens

a) Nehmen Sie 1 ml Brühkulturmedium und geben Sie 3-5 Tropfen Cefnitrothiophen-Arbeitslösung (1 mg/ml) hinzu;

b) Wenn innerhalb von 20-30 Minuten eine rote Farbe beobachtet werden kann, deutet dies auf eine β-Lactam-Enzymaktivität hin.

-3.4 Methode zur Analyse von Zelllysaten

a) Ultraschall-Lyse von 1 ml Zellsuspension;

b) 3-5 Tropfen Cefnitrothiophen-Arbeitslösung (1mg/ml) in die Lysesuspension geben; c) Wenn innerhalb von 20-30 Minuten eine rote Farbe zu beobachten ist, deutet dies auf eine β-Lactam-Enzymaktivität hin.

-3.5 Filterpapier-Analyseverfahren

a) Tränken Sie ein kleines Stück Filterpapier (~3x3cm), um die Cefnitrothiophen-Arbeitslösung (1mg/ml) aufzusaugen, und legen Sie es dann in eine saubere Kulturschale;

b) Springen Sie einen abgetrennten Klon und tragen Sie ihn auf das imprägnierte Filterpapier auf;

c) Wenn innerhalb von 20-30 Minuten eine rote Farbe beobachtet werden kann, deutet dies auf eine β-Lactam-Enzymaktivität hin.